【测评】Avantor 胎牛血清性能测试评估
作者：互联网
要说生科的水还是很深的，找个耗材、试剂总是被坑的事件屡见不鲜了！所以很多人明白了一个道理，图便宜没好货，找好货还得找大牌！就像胎牛血清（FBS），可以说是我们科研里比较常用，且用量大的试剂了！
无论是作为掺入研究、细胞水平的药物筛选，还是细胞克隆的筛选等等，我们都躲不过FBS这货！那么选什么大牌比较合适呢？当然是国际型试剂大牌才可靠~比如Avantor这个级别类型的，汉语名：艾万拓，这个相信大家都不陌生吧~世界500强里的生科巨头！资历老，产品成熟度高！
再来对他们家的pbs做个简单测评：
首先来个外观：标志还是需要认清楚的，别买到假货啊
1. FBS 性能测试
利用三种不同的细胞系对四种浓度下的供试品 (TA) 的批次性能进行评估。另外，也考察了细胞培养基中所用供试品浓度的影响。
FBS 最终用户采用各种方法评估细胞培养中 FBS 的质量。最有效的方法之一是低密度接种效率测试[1, 2]。接种效率是各种贴壁细胞系的个体特性（贴壁细胞/平板× 100）。在克隆接种密度下，细胞无法充分调节培养基，必须在很大程度上依赖于培养基的营养量。这两项接种效率研究中所用的实验设计基于上述方案[1, 2]。
1.1 材料与方法
由独立的商业测试实验室对来自三个供应商（AVANTOR Seradigm、GE HyClone 和 ThermoFisher Gibco）的随机选择的 FBS 生产批次进行接种率测试；每家供应商各两批（表 1）。在以下四种浓度下对 FBS 批次进行三次重复测试：10%、7.5%、5.0% 和 2.5%。FBS 对照是测试实验室的内部批次，所用三种细胞系在测定前均置于该对照中进行适应。FBS 对照批次与任何供试品批次均不同。
此外，还包括一批 AVANTOR Seradigm FB Essence（一种FBS 替代品），用于与 FBS 性能测试进行比较。从 ATCC 获得三种类型的贴壁依赖性细胞：CCL-34 (MDCK)、CCL-75 (WI-38) 和 CCL-61 (CHO-K1)。MDCK 和 CHO-K1 是可以无限传代的细胞系。WI-38 是一种特征明确的正常人类细胞，其寿命有限，群体倍增值约为 50（不传代）。所有这三种细胞系均已用于疫苗生产。每种细胞系的克隆细胞接种水平不同，并通过初步测试确定了本研究的克隆细胞接种水平。针对每个细胞系检查了三个细胞接种水平，以确保生成可用的数据。选择使大多数供试品获得最多信息的接种水平进行分析。
培养基由强化 Eagle 最低必需培养基 (EMEM) 和 FBS 或FBS 替代供试品组成。包含 Earle 盐的 EMEM（不含 L-谷氨酰胺）富含 0.1 mM 非必需氨基酸 (1 × NEAA) + 1 mM 丙酮酸钠 + 2 mM L-丙氨酰-L-谷氨酰胺（稳定谷氨酰胺）。EMEM 中不含 NEAA，故加入 NEAA 以支持需要 L-脯氨酸的 CHO-K1 细胞生长。丙酮酸钠提高了接种率[3]。L-谷氨酰胺的稳定形式消除了铵离子（L-谷氨酰胺在培养基中分解的天然产物）毒性累积的问题。铵离子毒性在具有定期给料计划、培养基更换和较高的细胞接种密度的培养条件下并不重要。在十天的孵育过程中，无需给料或更换培养液。在开始测试之前，将所有细胞系置于加有 10% 对照 FBS 的培养平板培养基中传代数次以便适应。因此，在测试开始时仅改变一种营养成分，即供试品。
将细胞接种到 96 孔 Eppendorf 板中。MDCK 以每孔 200、100 和 50 个细胞进行接种。WI-38 以每孔 320、160 和 80 个细胞进行接种。CHO-K1 以每孔 80、40 和 20 个细胞进行接种。为避免蒸发边缘效应，孔周围的槽沟充满 Dulbecco 磷酸盐缓冲盐水 (DPBS)。将平板在 37°C 和 5–7% 的 CO2 下不受干扰不补给营养物地孵育 10 天，然后固定在 1:1 DPBS/甲醇中，并用 0.5% 结晶紫进行染色。
利用光学成像 CTL S6 Macro 分析仪 (ImmunoSpot) 对染色的平板进行评估。该设备能够测定菌落点计数和面积百分比汇合。平板中的细胞形态决定使用斑点计数或面积百分比汇合。利用面积百分比汇合评估第一项研究的结果。另外，在第二项研究中（下文）使用斑点计数数据并得到一个结果。对三组重复的孔数据取平均值并以图形方式绘制。
图 1.FBS 性能挑战。MDCK 细胞的接种图像：TA 1–8 依次展示，在 A–H行中按照从上到下的顺序显示。TA 浓度：10%，1–3 列；7.5%，4–6列；5.0%，7–9 列；以及 2.5%，10–12 列。
客观的仪器评估消除了潜在的结果偏差解释。菌落点计数越多或细胞覆盖的面积百分比越大，表明性能越出色（图 1）。换句话说，这是供试品能提供更好营养支持的证据。
表 1.主要供试品，FBS 性能挑战。
1.2 结果
AVANTOR Seradigm FBS：
– 提供始终优越的营养支持。
– 在测试的所有三种细胞系中，两批 AVANTOR Seradigm FBS 的性能均优于两批 GE HyClone 和两批 ThermoFisher Gibco（图2、3 和 4）。
– 两批 AVANTOR Seradigm FBS 的性能均与 Seradigm FBEssence 相当（图 2 和 4）。
Avantor Seradigm FB Essence（FBS 替代品）：
– 与两批 GE HyClone 和两批 ThermoFisher Gibco 相比，FBS替代品在MDCK 和 CHO-K1 细胞表现出的性能与 FBS 性能相当或更优（图 2 和 4）。
图 2.FBS 性能挑战。图 1 所示的MDCK 细胞的接种图
图 3.FBS 性能挑战。WI-38 细胞的接种图。
图 4.FBS 性能挑战。CHO-K1 细胞的接种图。
2. FBS 替代品性能测试
FBS 的价格波动很大，且供应量波动明显。FBS 替代品适用于许多应用，并且在商业上为最终用户提供了三项主要好处：
– 作为 FBS 经济有效的替代品，节省成本。
– 增强供应链的连续性。
– 借助制造商的专有补充剂，提高批间细胞培养性能的一致性。
2.1 材料与方法
随机选择的 FBS 替代品的生产批次如下：AVANTOR Seradigm FB Essence、Gemini FetalPlex、Atlas EquaFETAL、HyClone FetalClone II（针对 CHO-K1 进行了优化）和 HyClone FetalClone III（针对各种应用进行了优化）（表 2）。不包括 HyClone FetalClone I，因为它针对杂交瘤进行了优化，而杂交瘤通常是不依赖贴壁的悬浮培养物。采用的所有细胞系都具有贴壁依赖性。
按照第 1 节所述进行接种率评估。利用适应于加有 10%FBS 对照的相同 EMEM 培养基的相同细胞原液。该研究中唯一改变的营养成分是 FBS 替代补充剂，用其代替 FBS 对照。利用菌落点计数进行 WI-38 结果评估，因为它与这些结果中的细胞形态密切相关。
2.2 结果
AVANTOR Seradigm FB Essence 性能相当于或优于 FBS 及其他 FBS 替代品。 FB Essence 性能与 FBS 的对比：
5.FBS 替代品性能挑战。AVANTOR FB Essence 相当于或优于其他 FBS 替代品。与其他样品相比，HyClone FetalClone III（TA 8，针对各种应用进行了优化）在MDCK 细胞中的性能明显更低，但在最高稀释浓度下除外。这一结果在针对 WI-38 和 CHO-K1 细胞的 TA 8 结果中未再次出现（图 6 和 7）。
图 6.FBS 替代品性能挑战。对于三个批次的 AVANTOR 中的两个批次，AVANTOR FB Essence 相当于或优于 FBS 对照 (TA 6)。
图 7.FBS 替代品性能挑战。AVANTOR 相当于或优于其他 FBS 替代品。TA 5 (Atlas EquaFETAL) 对 CHO-K1 细胞的性能明显低于 MDCK 或 WI-38。
与 AVANTOR Seradigm 的两批 FBS 相当（图 2 和 4）。
– 与 FBS 对照（所有三种细胞系上所有三个批次的 FB Essence）匹配，但 WI-38 上的 TA 1 除外（图 5、6 和 7）。
– 优于 GE HyClone 和 ThermoFisher Gibco 的 FBS 批次（图 2）。FB Essence 性能与其他 FBS 替代品的对比：
– 相当于或优于测试的其他 FBS 替代品（图 5、6 和 7）。
3. 整体研究结果
3.1 FBS 和 FBS 替代品浓度的影响
多年来，10% 的血清补充剂已成为公认的标准。这项 FBS 和FBS 替代品研究表明，在许多情况下，添加 5% 的补充剂可改善接种率。结果表明，对于 FBS 替代品和 FBS，在克隆平板密度下，稀释可以克服轻微的抑制作用（图 2 和 7）。
在显示 FBS 性能挑战和 MDCK 细胞的图 2 中，对于 8 种 TA中的 7 种（包括对照 FBS 和 FBS 替代品 FB Essence），浓度为 5% 时的性能优于 10% 时的性能。图 7 表现出与 FBS 替代品性能挑战和 CHO-K1 细胞类似的模式。同样，对于 8 种 TA中的 7 种（包括对照 FBS），浓度为 5% 时的性能优于 10%时的性能。但是，其中两种 TA（5 和 7）的性能优势很小。
4. 讨论
4.1 FBS 和 FBS 替代品性能挑战FBS 的性能因批次而异，并取决于特定的应用。变异性可归因
于两个主要来源，即自然生物变异和生产。
某些性能不一致是天然产品的生物变异所固有的，生产商无法控制。相反地，为保留原材料固有潜在性能，生产商可以对原材料转换为成品的各个方面进行质量控制。
在原材料的采集、处理和加工成成品的过程中，可能会降低潜在性能。一些生产商利用特定的方法和技术以保持产品的最佳性能并最大程度减少可避免的质量损失，最终用户应考虑采购这些生产商的产品。
另外，最终用户应认真考虑将 FBS 替代品作为减少批间差异的一种方法。客户这样做的其他原因是节省成本、制定更好的购买管理计划、更准确地预测供货和价格，并且在某些情况下在细胞培养中获得与 FBS 相当甚至更优的性能。
另外，作为购买前性能测试的一部分，最终用户可通过降低血清浓度进一步节省成本。针对培养系统开展实验，以确定其对于您的应用是否有效。
生产商努力获得高质量、性能一致的成品。这些研究突出显示了 FBS 和 FBS 替代品的营养性能，并表明细胞系在类似条件下可能不具有类似的稳健性。研究证明了在购买前进行批次测试的必要性，特别是对于营养要求严格的细胞系。
参考文献
[1] Freshney RI.Section 8.6.2, Testing serum.In Culture of animal cells: a manual of basic technique and specialized applications, 7th edition.John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, New Jersey; 2016.
[2] Hay RJ, Caputo J, Macy ML, eds.ATCC quality control methods for cell lines, 2nd edition.American Type Culture Collection, Rockville, Maryland; 1992; pp 7-10.
[3] Freshney RI.Section 16.2.1, Conditions that improve clonal growth.In Culture of animal cells: a manual of basic technique and specialized applications, 7th edition.John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, New Jersey; 2016.
标签：FBS,AVANTOR,测评,性能,细胞,Avantor,胎牛,替代品,细胞系 来源： https://blog.csdn.net/Bio12345/article/details/113391738