生化实验理论

1.比色法：利用比较溶液颜色的深浅来测知溶液中所含有色物质浓度的方法。

可见光分光光度法：用可见光（400-760nm）测定有色物质含量的方法

 

2.分光光度法

紫外光分光光度法：用紫外光（200-400nm）测定无色物质含量的方法。

3.单色光：单波长的光

4.光的色散：混合光分解成单色光的现象。

5.互补色：两种适当颜色的光按一定强度比例混合可以形成白光，这两种光成为互补色光。

6.吸光度E：溶液对光线的吸收程度。

7.标准曲线法：标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与待测组分相同的色谱条件下，等体积准确进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准曲线

8.朗伯比尔定律：光吸收程度A和吸收层厚度L、吸收物浓度C之间的关系。

A=K×C×L K为吸光系数

K=A/C×L

9.电泳:带电质点在电场力的作用下发生定向移动的现象。

10.电泳技术：利用电泳现象进行物质分离、纯化及鉴定的技术。

11.迁移率M：指带电质点在单位电场强度下的电泳速度。 （公式P31）

12.离心技术：根据不同物质的沉降系数、密度不同，在同一转速、同一部位受到的离心力不同而出现不同的沉降速度，从而达到浓缩、分离纯化的目的。

低速<6000rpm

中速6000-15000rpm

高速>15000rpm

实验一：双缩脲法测定蛋白质含量

◎蛋白质的双缩脲反应：蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物，此反应和双缩脲在碱性溶液中与铜离子作用生成紫红色反应相似，故称双缩脲反应。

◎蛋白质浓度（g/L）=蛋白质含量（mg）×10-3/0.1mL×10-3

◎人正常浓度60-80g/L

实验三：紫外光分光光度法测定蛋白质含量

◎根据蛋白质中酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸在280nm具有吸收峰进行定量，将样品直接放到紫外管分光光度计上进行测定。

◎Lowry-Kalcker公式：蛋白质浓度（mg/mL）=(1.45A280-0.74A260)×500

实验六：血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳

◎蛋白质为两性电解质，其氨基酸残基上含有可解离的酸性或碱性基团，在pH不同的溶液中可进行酸性或碱性电离。

◎等电点：在某一pH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，所带净电荷为零，呈电中性，此时溶液的pH称为该氨基酸的等电点。

◎血清中各主要蛋白质的等电点均低于pH8.6以醋酸纤维素为支持介质，电泳分离后经染色处理可将血清蛋白质分成五条主要条带，从正极起依次为

白蛋白,α1—球蛋白、α2—球蛋白、β—球蛋白、γ—球蛋白

实验九：氨基酸薄层分析

◎吸附薄层层析是将吸附剂等材料均匀地铺在玻璃板或其他薄板上，形成薄层然后在上面进行层析的方法。吸附剂-硅胶，展开剂-正丁醇+冰乙酸+水

◎染色：茚三酮，氨基酸显色反应

◎Rf=原点到斑点距离/原点到展开剂前沿距离

实验十四：碱性磷酸酶ALP的动力学分析

◎底物磷酸苯二钠---------ALP水解------生成游离酚+磷酸盐------酚在碱性环境与4-氨基安替◎比林作用、经铁氰化钾氧化-----------生成红色醌衍生物-----比色测定

◎酶本质是蛋白质

◎酶促动力学是研究pH、温度、底物浓度、抑制剂等对酶活性的影响。

◎人体内大多数酶最适pH为6.0-8.0，胃蛋白酶1.5-2.0，ALP为8.6-10.0.

◎酶活性单位：100ml酶液在37℃保温下15min产生一个酚者。

◎酶抑制剂：凡降低酶活性的物质。分为可逆性和不可逆性可逆性又分为竞争性和非竞争性。

◎底物浓度[S]与酶促反应速度V关系【米氏方程】：

V=Vm◎[S]/(Km+[S]) Km为米氏常数

◎双倒数法Lineweaver-Burk

实验十五：测定血糖及激素对血糖浓度的影响

◎葡萄糖氧化酶法GOD-POD法：葡萄糖氧化酶(GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。

◎测定管血糖浓度（mmol/L）=测定管吸光度/标准管吸光度 ×5mmol/L

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