表皮干细胞培养优化解决方案
作者：互联网
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随着烧伤、创伤等疾病的明显上升， 外科手术对于皮肤组织的需求也相应增加， 自体皮肤移植往往受到限制， 组织工程皮肤的研发具有重要的临床应用价值。目前， 构建理想的人工皮肤成为本领域研究的一大热点。由于表皮干细胞具有无限增殖的能力， 因此， 在人工皮肤的研究中具有重要作用。表皮干细胞的分离培养方法多样， 用于鉴定表皮干细胞的标记物有很多， 但某些标记分子缺乏特异性， 如何筛选特异性的标记分子来区分表皮干细胞显得尤为必要。
正常的皮肤分为表皮和真皮， 其中表皮分为5层， 由内向外依次为基底层、棘细胞层、颗粒细胞层、透明细胞层和角质细胞层。基底细胞位于表皮最内层的基底膜上， 而表皮干细胞则存在于表皮的基底层和毛囊的隆突部， 大多数情况下， 表皮干细胞处于静息状态， 在受到创伤或理化等因素刺激下可激活， 可增殖分化为表皮中各种细胞成分， 保持皮肤正常的表皮结构。由于表皮干细胞具有无限增殖的能力， 因此， 可用于组织工程皮肤的研究中。表皮干细胞的原代培养可采用胶原快速粘附， 可使表皮干细胞及时贴壁生长， 在培养过程中， 为防止病原体的污染， 可在组织分离过程以及完全培养液中加入青霉素及链霉素等。目前， 表皮干细胞的鉴定主要依据其表面特异性的标记分子， 研究表明：CD34可作为小鼠干细胞的表面标记， 而人的毛囊区也有CD34的表达[1]。角蛋白14和15、 α6整合素[2， 3]、β1整合素[4]以及CK19[5]等均为表皮干细胞的标记分子。而表皮干细胞的特异性标记物还有待进一步研究证实， 才能将其与其他角朊细胞区分开来。
表皮干细胞培养优化解决方案
(一)X-VIVO无血清造血细胞培养基
这个系列是属于化学成分限定培养基，为包括淋巴因子激活杀伤细胞(LAK)、外周血淋巴细胞(PBL)和肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)在内的多种细胞提供营养完整和平衡的环境。此类培养基不包含任何外源性生长因子、人工促进细胞增殖的物质或未定义的补充物。它们不含任何蛋白激酶C刺激因子，适用于研究人类和小鼠淋巴细胞激活中的第二信使系统。
✍以下X-VIVO产品均已在FDA备案。
(二）UltraCulture培养基
✍UltraCULTURE™培养基（12-725F）是一种通用型无血清培养基，用于培养多种哺乳动物细胞类型。
✍UltraCULTURE™培养基主要由DMEM、F-12、重组人胰岛素、牛转铁蛋白和牛血清蛋白混合物（包括白蛋白）组成。
✍UltraCULTURE™培养基的总蛋白质浓度约为3mg / ml，不含L-谷氨酰胺，因此使用时每500mL培养基需要添加200mM的L-G（17-605）5mL。
✍UltraCULTURE ™培养基也已经在FDA备案。
✍培养多种哺乳动物的原代细胞和确立细胞株（包括单核细胞、巨噬细胞细胞系、上皮细胞和成纤维细胞；
✍UltraCULTURE培养基添加5%的胎牛血清也能够用于内皮细胞的培养）。
✍在杂交瘤形成期间促进细胞融合；
✍疫苗生产中促进病毒颗粒的产生；
✍可以添加防冻剂（12-132A）后在无血清环境冻存细胞。
注意：UltraCULTURE™培养基可能会出现浑浊，但不影响使用（使用过程中导致的污染不涵盖在内）。
（三）黄金组合系列
黄金组合-500mL UltraCULTURE ™（Lonza，12-725F）+10mL
Ultroser ™ G（Pall，15950-017）+5mL L-G（17-605E）
可用于多种干细胞（间充质干细胞、脂肪干细胞、胚胎干细胞）的培养研究。
参考文献（上下滑动查看）
[1] Miriam Y. Kim,et al(Cell,2018).Genetic Inactivation of CD33 in Hematopoietic Stem Cells to Enable CART Cell Immunotherapy for Acute Myeloid Leukemia.
X-VIVO 15添加5%人血清、青链霉素和谷氨酰胺培养筛选出的CD34+ T细胞，用含有CAR33构建体的慢病毒转染T细胞，敲除CD33基因，靶向AML细胞表面抗原，保留正常骨髓祖细胞的造血功能，从而治疗急性髓系白血病。
[2] Justin Eyquem,et al(Nature,2017).Targeting a CAR to the TRAC locus with CRISPR/Cas9 enhances tumourrejection.
X-VIVO 15添加5%人血清、200U/mL IL-2培养CD3/CD28激活的T细胞，用CRISPR/Cas9将CD19特异性CAR基因靶向导入TARC位点，可增强抗肿瘤效果。
[3]Jang Hwan Cho(2018).Universal Chimeric Antigen Receptors for Multiplexed and Logical Control of T Cell Responses.
UltraCulture添加2mM L-G、200U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、1mM丙酮酸钠、5mM丁酸钠培养转染后的HEK293制备慢病毒，收集病毒后，接种到用X VIVO 15培养的T细胞进行后续实验。
[4] Nathalie Meuleman (2006).Human marrow mesenchymal stem cell culture: serum-free medium allows better expansion than classical a-MEM medium.
UltraCulture 添加2% Ultroser G（PALL）、2mML-G、1%抗生素-抗真菌药培养MSC，培养的细胞数量和细胞的多功能性均比添加15%FBS的α-MEM好。
[5] Oksana Lockridge(2018).Comparison of Hupresin® to procainamide-Sepharose for purification of butyrylcholinesterase and acetylcholinesterase
培养CHO，用于表达部分糖基化人丁酰胆碱酯酶;
[6]Hua-Jiang Dong(2017).The Distribution of Transplanted Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells in Large Blood Vessel of Rats With；用于培养人脐带间充质干细胞;
[7]Ming Zhu, (2017).Curcumin protects mesenchymal stem cells against oxidative stress-induced apoptosis via Akt/mTOR/p70S6K pathway.用于大鼠来源MSC的培养.
标签：解决方案,UltraCULTURE,干细胞,细胞,培养,表皮,培养基 来源： https://blog.csdn.net/Bio12345/article/details/112799230